11问答网
所有问题
当前搜索:
western blot步骤
westernblot
内参蛋白什么时候加
答:
内参检测的时候加。在WB实验中,除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等常规
步骤
以外,还需要极其关键的一步,那就是内参检测,通过内参蛋白的表达量作为参照,校正蛋白定量和上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。
免疫组化和
westernblot
有什么区别
答:
1、原理不同:免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。
westernblot
也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的...
Western
Blot
为什么必须要用内参
答:
Western
Blot
实验中,除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样 电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等
步骤
以外,还需要进行内参的检测,以校正蛋白质定量、上 样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性 。在国外发表的文章中,Western Blot 实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。但是,国内仍有...
westernblot
内参GAPDH成功了
视频时间 1:40
iNOS蛋白表达量的
western
blot
测定:一抗:NOSII型鼠单克隆抗体,这个抗体...
答:
肯定会有结果。另外,建议你再开始实验前,最好掌握western的原理,这样在选购试剂和抗体的时候可以根据自己现有条件掌握。一般厂家会有推荐浓度,但是具体的
步骤
,网上到处都有。下面这个供参考,自己根据情况可以有所变化 http://www.millipore.com/immunodetection/id3/
westernblotting
protocols ...
western
blot
收样时为什么放在冰上
答:
western
blot
一般需要冰浴的
步骤
有 样品处理:比如超声破碎处理时,因为超声破会带来热量的产生,一般需要在冰上或者冰浴处理。主要目的是防止样本处理过程中目的蛋白发生降解 转膜:在转膜的时后因为电流电压的原因,特别是高电流快速转膜时,通常会有非常严重的发热现象。为了中和热量,一般需要在冰上或者冰...
Far-
Western
印迹法是不是就是Western
Blot
答:
基本
步骤
都是类似的,只不过你做WB的时候是用一抗去标记膜上的蛋白,再用二抗去标记一抗,而坐FW的时候是用带标记的另一个蛋白代替一抗去标记膜上的蛋白,如果这两个蛋白之间可以相互作用,那就可以标记上,然后用二抗或者其他标记物去结合第一个蛋白上的标记物增强特异性 最后显出来,也就是说FW是...
Western
blot
化学发光(ECL)时,条带特别弱势怎么回事啊?有哪些
步骤
是需...
答:
条带弱和整张膜发光原因是不同的。条带弱一般是因为表达量低,或者一抗的问题,比如质量不好或浓度太低或孵育时间太短。整张膜发光则是因为发光液的杂质含量太多,一抗洗涤不充分也可能导致整张膜发光。把一抗、洗涤和封闭的原因排除之后,仍然有整张膜发光,那就是发光液的质量问题。所以选择质量好...
Western
Blot
为什么必须要用内参
答:
另外,蛋白质定量以后进行电泳时需要等量上样,此
步骤
也存在操作误差。在
Western
Blot
实验时使用内参,即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。在Western Blot中使用内参其实就是在WB过程中,同时用内参对应的抗体检测内参,这样可在检测目的蛋白的同时检测内参的表达。由于内参在各组织和细胞中的表达...
Western
Blot
为什么必须要用内参
答:
Western Blot为什么必须要用内参 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。因为
WesternBlot
操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然,顺利的时候WesternBlot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果...
<涓婁竴椤
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
其他人还搜